Tartalom
A hideg alkoholt arra használják, hogy elválasztja a DNS-t vízalapú oldatoktól, lehetővé téve, hogy a későbbi genetikai vizsgálathoz tisztítsák. Alkohol hozzáadása a DNS-t tartalmazó oldathoz egyszerű módja annak, hogy alacsonyabb hőmérsékleten tiszta legyen, és lelassítja az enzimeket, amelyek lebontják, és így jobb extrakciós eredményeket kapnak.
Sejtfalak törése
A tiszta DNS előállításához szükséges extrakciós eljárásoknak meg kell szüntetniük a szövet összes molekuláris és kémiai összetevőjét, amelyből a DNS-t extraháljuk. Az első lépések a sejtfalak megsemmisítését foglalják magukban. Ezt különböző kémiai szerekkel lehet elvégezni, amelyek a sejtmembránokra maró hatásúak, de nem károsítják a DNS-t. A sejteket ultrahanggal is kezelhetjük, homogenizálhatjuk vagy őrölhetjük a membránok elpusztítására.
A sejtfalakat el kell pusztítani, hogy elérjük a bennük levő DNS-t (72 sejtek a chrisharvey által a Fotolia.com-tól)
A lipidek eltávolítása
Amint a sejtfalak megsemmisülnek, mosószert adnak hozzá, hogy megszabaduljon a sejtmembránokat alkotó zsíroktól és olajoktól. A mosószerek az olajokban és zsírokban oldódnak.
Fehérjék eltávolítása
A fehérjéket és enzimeket emészthetjük az oldathoz egy proteáz hozzáadásával. A proteázok a fehérjéket kis peptidekké és aminosavakká bontják.
Csapadék DNS
A jéghideg alkohol hozzáadása az oldathoz kicsapja és aggregálja a DNS-t. A genetikai anyagot a minta centrifugálásával és a folyadékréteg dekantálásával lehet összegyűjteni. A centrifugacső alján kis üledékként kell léteznie.
Tisztító DNS
A DNS-t hideg alkoholos oldatban történő szuszpendálással mossuk, és többször centrifugáljuk, hogy nagyon tiszta mintát kapjunk. A tipikus alkoholok közé tartozik az etanol és az izopropanol. Ez a folyamat egy nagyon tiszta mintát tesz szigorú tesztekben.
