Tartalom
A nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC) az anyagok keveréktől való elválasztására szolgáló eszköz. Egyes vegyi anyagok elválasztása és azonosítása főleg a rendszer kromatográfiás oszlopában történik. Számos oszloptípus áll rendelkezésre a CLAE számára, és mindegyiket egy adott típusú elemzéshez használják. A C18 oszlop a legerősebb általában nem poláros. Hosszabb ideig tartó folyamatos használat után az oldószer átfolyási sebessége csökken és az elemzési idő nő. Az elemzési idő csökkenésének másik oka az, hogy olyan minták vannak, amelyek kis mennyiségű vegyszert hagynak az oszlop anyagában, csökkentve az elválasztás képességét. Felületének helyreállítása történhet úgy, hogy az anyagot egy sor speciális oldószerrel kezeljük, hogy megtisztítsuk a maradék mintáktól és újjáélesszük a hordozóanyagot.
1. lépés
Távolítsa el a C18 oszlopot az áramlás irányából, és helyezze az ellenkező irányba. Az oldószer visszavezetése enyhíti az idő múlásával fellépő felhalmozási hatást. Ügyelni kell arra, hogy ne maradjon túl sok anyag az oszlop végén. Egyes gyárak nagyobb hálót használnak a tetején, így amikor az áramlás iránya megváltozik, akkor a háló az alábbi helyzetben van. Ezt a helyreállítási módszert áramlás megfordításának nevezzük. Annak megakadályozása érdekében, hogy a felhalmozódás a rendszer érzékelőjébe áramoljon és esetleg akadályt okozzon, hagyja működni anélkül, hogy az érzékelő csatlakoztatva lenne, és irányítsa az áramlást az oszlopból a hulladékba.
2. lépés
Helyezze az oldószer-átjáró csövet oldószer-sorozatba, hogy az oszlopban visszatartott vegyületeket az ellenkező irányba eluálhassa. Ezek az oldószerek hidrofil tulajdonságaikban különböznek. Változtatásukkal ugyanolyan változatos hidrofil természetű vegyületeket eluálsz. Használjon egymás után 50 ml-t a következő oldószerek mindegyikéből: víz (ha puffert használ), metanol, izopropanol, diklór-metán, hexán, diklór-metán és izopropanol.
3. lépés
Cserélje ki az oszlopot a megfelelő irányba, és az oldószert engedje átfolyni rajta. Használat előtt legalább 75 ml-t használjon a mosáshoz. Tesztelje egy új mintával használt mintával, és ellenőrizze az eredményeket. Ügyeljen a maximális retenciós pontok és a teljes elemzési idő elérésekor. Az, hogy ezek az attribútumok mennyire felelnek meg az eredeti tesztnek, amikor még új volt, jelzi az oszlop helyreállításának mértékét. Ha az eredmények nem kielégítőek, cserélje ki az oszlopot egy újra, és dobja el a régit.
