Tartalom

• irányok
• Az oszlop helyreállítása
• tippek
• figyelmeztetés
• Amire szüksége van

A nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC) a laboratóriumi analízis általános módszere, amelyben a mintát kémiai összetevőikre választjuk el, amikor az áthalad egy oszlopon. Ezt az oszlopot porózus anyaggal, tipikusan szilikagéllel töltjük. Egy standard fordított fázisú oszlop, mint a C8, néha eltömődhet vagy szennyeződhet. Ezeket az oszlopokat nagyon egyszerű technikákkal lehet letölteni.

irányok

A megfelelő oldószer egy piszkos oszlopot tud helyreállítani (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

Az oszlop helyreállítása

1. Kapcsolja ki az oszlopot, és fordítsa vissza a pozícióját, hogy a mozgófázis most belépjen az oszlop kimenetén. Csatlakoztasson egy aljzatot az oszlop másik végéhez (ez volt az eredeti bejegyzés), és hagyja, hogy ürítse ki a kisülést.

2. Egy sor oldószert pumpáljon a csökkenő polaritás szerint. Az ajánlott alapsorozat metanollal kezdődik, majd acetonitrilre, majd acetonitril / izopropanol (75:25), izopropanol, metilén-klorid és hexán elegyére. Ha a mozgófázis, amely az oszlopban volt, abszorbens, akkor a metanolban vízzel való áthaladás ajánlott. Egy-két milliliter / perc áramlás elegendő, és minden oldószerből körülbelül tíz térfogat-oszlopot kell szivattyúzni. A térfogatoszlop az oszlop belső területe, és ezt kiszámítja (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), ahol DI az oszlop belső átmérője és L a hossza.

   
   

3. Az oszlopon további 10 térfogat izopropanolt pumpálunk, hogy az eredeti mozgófázissal való használatra elkészüljön. Ha az eredeti mozgófázis párnázott, akkor az izopropanol után az oszlopon is szivattyúzza a vizet, mielőtt visszatérne az eredeti mozgófázisba.

4. Kapcsolja ki az oszlopot, fordítsa vissza, és kapcsolja be újra, hogy az eredeti helyzetében legyen (úgy, hogy a mozgatható fázis az oszlop jobb oldalába kerüljön). Csatlakoztassa újra a hangszóró kimenetet az érzékelőhöz.

tippek

• Ha ez az eljárás nem tisztítja meg alaposan az oszlopot, 50:50 arányú dimetil-szulfoxid (DMSO) és dimetil-formamid (DMF) alkalmazható. A fehérjék és a fémionok maradékai más típusú oldószereket igényelhetnek, mint például ioncserélő reagensek vagy etilén-diamin-tetra-ecetsav (EDTA) oldata.

figyelmeztetés

• Bizonyos készülékekben a gerinc egy durva fém szitával lesz ellátva. Ebben az esetben az oszlop visszaállítása lehetővé teszi, hogy az állófázis elhagyja az oszlopot, és ez nem ajánlott. Ha nem biztos benne, forduljon a forgalmazóhoz.
• Az ebben az eljárásban alkalmazott oldószer potenciálisan mérgező, ha lenyelik és belélegzik. A kezelés során használjon normál laboratóriumi óvintézkedéseket.

Amire szüksége van

• HPLC eszköz
• víz
• metanol
• acetonitril
• izopropanol
• Metilén-klorid
• hexán